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defgf10aj
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 Wysłany: Wto 5:59, 01 Mar 2011 Temat postu: UGG España 抗HSV—2糖& |
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抗HSV—2糖蛋白单链抗体基因的构建及表达的研究
n和连接子的连接重组质粒用EcoRI和PstI双酶切后，可切出v基因与连接子相连的400bp片段。‘2．2表达载俸的构建和鉴定构建的重组质粒用PstI和XhoI双酶切后，可切出约500bp和Z00bp的两片段(3D8VL基因中第124bp处为PstI和XhoI酶切位点)；用HindⅢ和XhoI双酶切后，可切出约850bp的片段。以表达载体为模板，分别用VBack、VHFor和VLBack、VLFor为引物进行PCR鉴定，可扩增出360bpVH和330bpV片段细胞与分子免疫学杂志1996年l2卷第2期J~lrnalotCellularandMolecularImmunologyVo1．12No．21996·47·2．3表达产物的初步鉴定SDS—PAGE的结果显示，表达菌与对照菌相比，在约31kD处明显多出一条蛋白带，表达量约为菌体总蛋白的16。其分子量与根据氨基酸序列推导的分子量大致相同。ELISA阻断试验表明，表达的SeFv可部分阻断CHA9MeAb与HSV一2的结合。夹心EIISA表明．ScFv可与特异HSV一2结合。3讨论小分子抗体具有免痉原性小，组织穿透性强，能到达病毒“峡谷”(Canyon)表面．以阻断其中的抗原及受体结合位点。本文用编一码15个氯基酸的连接子(Gly4Set)3，将CHA9V基因与V基因连接,[link widoczny dla zalogowanych]，克隆入单链抗体表达载体PHEN1中。此载体带有细菌PelB前导肽序列，编码的前导肽可引导表达的ScFv前体蛋白穿过菌体内膜，进入宿主菌周质，在此折叠装配成可溶性抗体片段，因而减少了烦琐的表达后处理过程。目前常用PCR法将Vlinker、V相连接来构建单链抗体基因(PCRassembly)，但是在PCR扩增中可发生碱基错误掺入而导致目的基因突变。我1。m至单链抗体构建中采用分段连接克隆的方法，避免了PCR法的不足。(收稿1996-04-17修回1996—04—28)，粕幸，章链1目鸯，鬏硒锺反庄用PCR扩增的人抗体重链Fd基因构建抗体重链基因库至生姜绍谆马文惺(第四军医太学微生物学教研室，西安710032)，三查(军事医学科学院微生物流行病研究所，北京100071)我们以往报道了，以人外周血B淋巴细胞的eDNA为模板，扩增出抗体重链可变区基因在此基础上，本文报道用扩增的重链Fd基目．构建人源j生抗体重链基因库的实验研究,[link widoczny dla zalogowanych]。l材料和方法1．1质粒、菌株载体pComb3．宿主菌大肠杆菌XLI—Blue，由王海涛教授提供1．2pComb3质粒的制备挑单个菌落至LB培养基中过夜活化，次日按1接种至】O0m】LB培养基中(舍100,ug／ml羧苄青霉素)，37℃振摇20～24h．按碱裂解及聚乙二醇沉淀法提取质粒，存放--20C备用。1．3抗体重链基因库的构建将从人外周血B淋巴细胞中扩增的人抗体重链Fd基因R；f4-e及7拉片段混合，抽提及电泳纯化后，用内切酶SpeI+XhoI酶解,[link widoczny dla zalogowanych]。按3：1(摩尔比)与SpeI／XhoI酶解的pComb3连接，电穿孔转化大肠杆菌XLI—Blue(按BIO—RAO公司的产品说明书操作)．加入3mls0c培养基．37℃摇1h,[link widoczny dla zalogowanych]，加入10mlSB培养基(舍50,[link widoczny dla zalogowanych],ug／ml羧苄青霉素)．混匀后取菌液铺于IB平板(含100#g／ml羧苄青霉素)．以确定库容量。37℃摇1h后．加入100mlSB，37C过夜。2结果取抗体重链Fd基因片段与pComb3的连接物1l，经1琼脂糖凝胶电泳后见有较载体分子量太的DN段出现．说明连接成功。电穿孔法转化犬肠杆菌XLI—Blue后．取10出菌液作2O倍稀释铺于IB平板
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katuba8670
Dołączył: 22 Lut 2011
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| Wysłany: Pon 6:38, 07 Mar 2011 Temat postu: |
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本周末票房强劲，至少在第一眼。 “ 兰戈 “（派拉蒙电影公司），左，动画，语音特色条目 约翰尼德普 ，是北美洲第1的销售约3,800万美元的票房。 [link widoczny dla zalogowanych] “ 该调整局 “（环球影业）是浪漫第二，估计2 090万美元，惊悚片暨一个很好的结果了难以市场科幻。 哥伦比亚广播公司甚至陷入困境的电影，参展大大改进营销，有其物美价廉“一个体面的周末 兽 “，它出售万美元排名第三10.1。 因此，在好莱坞是一个闷闷不乐的心情？ 影迷耗资1.35亿美元上周末的门票超过总，一个由31个百分点下降一年前同期，据Hollywood.com，其中编译票房统计。[link widoczny dla zalogowanych] [link widoczny dla zalogowanych] 到目前为止，今年门票收入就下降了20个百分点下降百分之出席了22。 问题是，虽然电影已经做得很好，一直没有板一鸣惊人的那种电梯，可以在观影的兴趣。 （去年，这是“ 爱丽丝梦游仙境 “。）舍入列前五位是两个遗留下来的，” 霍尔通行证 “（ 华纳兄弟 ）万的销量约为27 9百万元在周总的门票为两年，而“Gnomeo与茱丽叶“（ 沃尔特迪斯尼 ）出售了大约690万美元的一八千三百七十零点○○万美元四个星期总计。[link widoczny dla zalogowanych]
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