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defgf10aj · Wysłany: Czw 11:40, 31 Mar 2011 Temat postu: tory burch outlet 黄茶的HT-29&

黄茶的HT-29人体结肠癌细胞的体外抗癌效果
二氧化碳培养箱MCO96(日本三洋电机株式会社)；超净工作台HB一402V(韩国Hanbeak科学株式会社)；倒置显微镜PM一10AK(日本奥林巴斯株式会社)；酶标仪Elx800(美国BioTekinstruments公司)；荧光显微镜BX50(日本奥林巴斯株式会社)。2方法2．1MTT法癌细胞体外增殖抑制试验将HT一29结肠癌细胞接种于含10％灭活小牛血清的RPMI1640培养液中，在5％CO、37cI=充分湿化条件下的培养箱中培养，每周更换2～3次培养基，6～7d传代一次。将培养的癌细胞按1×10个／mL接种于96孔培养板,[link widoczny dla zalogowanych]，每孔180btL。5％CO，、37℃充分湿化条件下培养24h。细胞贴壁后按每孑L20加入样品。孔内试验时，每个样品设两个剂量组，分别为200ttg／mL和400／zg／mL。48h培养后，每孔加入2OLMTF试剂(质量浓度为5mg／mL)继续培养4h，结束培养后吸弃孔内上清液后，按每孔150加入DMSO后震荡30min，540nm波长下用酶标仪测定各孔OD值并计算细胞增殖抑制率。抑制率(％)=[(空白孔OD值一样品孔OD值)／空白孔OD值]×100％[2-43。2．2DAPI荧光染色的癌细胞凋亡观察经样品处理后的癌细胞用PBS洗后用3．7％的多聚甲醛(Paraformaldehyde)常温下固定细胞10min，然后用荧光染料4，6一diamidino一2一phenylindole(DAPI)溶液染色10min。用PBS溶液漂洗染色后的细胞2次，荧光显微镜下进行形态学观察并拍2．3Reversetranscription-polymerasechainreac-tion(RT．PCR)分析同等条件下用RNAzol试剂制备HT一29结肠癌细胞总RNA。定量分离到RNA后，以oligodT为引物，在AMV逆转录酶作用下制备SScDNA，然后以该cDNA为模板，RT—PCR法扩增Bax，Bcl一2基(表1)。持家基因glyceraldehyde一3一phosphatedehydrogenase(GAPDH)作为内参照。实验结束后,[link widoczny dla zalogowanych]，以1％琼脂电泳(含浓度溴化乙锭)检查PCR扩增产物表1RT．PCR引物序列基因引物序列同义5．ATG-GAC—GGG-TCC—GGG—GAG-3反义5+TGG-AAGAAGATG-GGC．TGA．3同义5．CAG—CTG—CAC—CTG-ACG一3反义5一GCT-GGG-TAG-GTG-CAT-3同义5一CG0AGT-CAA—CGG—ATT．TGG—TCG-TAT-3反义5一AGC．CTT．CTCCAT-GGT．GGT—GAA．GAC．33结果与分析3．1茶叶体外抗癌作用试验效果结果显示，两种样品对HT一29结肠癌细胞均具有一定的抑制作用，且抑制效果随样品质量浓度呈梯度关系。以400gg／mL质量浓度处理HT一29细胞时,[link widoczny dla zalogowanych]，两种茶叶均表现出很强的抑制率,[link widoczny dla zalogowanych]，分别为80％(黄茶)和70％(绿茶)。以200ktg／mL质量浓度处理HT一29细胞时，癌细胞生长抑制率分别为40％和27％(表2)。由此可见，两种茶叶对HT一29结肠癌细胞均具有较强的抑制率，其中黄茶的抑制效果更明显。表2茶叶的甲醇提取物对HT一29人体结肠癌细胞体外抗癌作用MTT实验结果组别0D值(样品质量浓度)200mL400tw,／mL对照2．520±0．004”均值±标准偏差抑制率(％)3．2茶叶诱发癌细胞凋亡的效果DAPI染色后，凋亡细胞核能发出蓝色荧光,[link widoczny dla zalogowanych]，通过观察细胞着色情况我们即可判定细胞是否凋亡。x附髓
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